鼻NK/T细胞淋巴瘤中组织蛋白酶D和E论文

【关键词】  鼻肿瘤；淋巴瘤,T细胞；杀伤细胞,天然；免疫组织化学；原位杂交；组织蛋白酶D；E

　　Expressions and significances of cathepsin D and Eselectin in nasal NK/T cell lymphoma

　　【Abstract】 AIM: To explore the expressions and significances of cathepsin D (CD) and Eselectin in the newly recognized nasal NK/T cell lymphoma. METHODS: Immunohistochemical SP method was used in 41 cases of nasal nonHodgkin s lymphoma to examine the expressions of CD45RO, CD3ε, CD20, CD79α, CD56  and TIA1; In situ hybridization for EBER1/2 (EBERISH) was used to examine EpsteinBarr virus (EBV) infection. As a result, 21 cases of nasal NK/T cell lymphoma were diagnosed according to the newly published WHO standard. The expressions of CD and Eselectin were detected immunohistochemically in the 21 cases of nasal NK/T cell lymphoma and 10 cases of lymphoid hyperplasia. RESULTS: CD was expressed intensively in plasma of scattered stromal histiocytes and the positive signal of CD in nasal NK/T cell lymphoma was much stronger than that in lymphoid hyperplasia （t=39.12, P＝0.000）. The positive signal of Eselectin was expressed in vascular endothelium and the mean positive rates of the 2 groups had no significant difference statistically(t=0.688, P＝0.497). CONCLUSION: The higher expression of CD in the stroma of nasal NK/T cell lymphoma may relate to the high aggressiveness of nasal NK/T cell lymphoma, while Eselectin may have no intimate correlation with it.

　　【Keywords】 nasal neoplasms; lymphoma, T cell; killer cells, natural; immunohistochemistry; in situ hybridization; cathepsin D; Eselectin

　　【摘要】  目的： 探讨组织蛋白酶D（CD）和E选择素(Eselectin)在鼻NK/T细胞淋巴瘤中的表达及意义. 方法： 采用免疫组化SP法检测41例鼻部非霍奇金恶性淋巴瘤CD45RO, CD3ε, CD20, CD79α, CD56和TIA1的表达；EBER原位杂交法检测EB病毒感染情况，根据最新WHO分类及诊断标准诊断鼻NK/T细胞淋巴瘤；对完全符合诊断标准的21例鼻NK/T细胞淋巴瘤和10例鼻咽增生淋巴组织活检标本，用免疫组化方法检测CD和E选择素的表达. 结果： 鼻NK/T细胞淋巴瘤间质中组织细胞CD阳性信号的表达明显高于增生淋巴组织组(t=39.12, P＝0.000）；E选择素表达于血管内皮细胞，鼻NK/T细胞淋巴瘤与鼻咽增生淋巴组织中E选择素平均血管阳性率差异无统计学意义（t=0.688, P＝0.497）. 结论： 鼻NK/T细胞淋巴瘤间质中CD的表达明显增高，与该肿瘤高度侵袭性相关；E选择素与鼻NK/T细胞淋巴瘤恶性生物学行为无直接相关性.
 
　　【关键词】 鼻肿瘤；淋巴瘤，T细胞；杀伤细胞，天然；免疫组织化学；原位杂交；组织蛋白酶D；E选择素

　　0引言

　　新的研究表明，蛋白水解酶D（cathepsin D, CD）表达增高与许多恶性肿瘤的侵袭转移密切相关［1-3］， E选择素（Eselectin）作为介导肿瘤细胞与血管内皮细胞发生黏附的一种黏附分子，其受体和配体的相互作用在肿瘤转移过程中也发挥了一定作用［4-5］. 鼻NK/T细胞淋巴瘤是一种新的单独病变实体，也是鼻部区域最常见的恶性淋巴瘤，其临床具高度侵袭性，并有血管中心性破坏的特点. 我们应用免疫组化和原位杂交方法，根据最新WHO诊断标准严格诊断鼻NK/T细胞淋巴瘤，并对其进行CD和E选择素表达的研究，旨在探讨CD 和E选择素在鼻NK/T细胞淋巴瘤不良生物学行为中的作用.

　　1材料和方法

　　1.1材料41例鼻咽部非霍奇金恶性淋巴瘤和10例鼻咽部增生淋巴组织石蜡标本均取自第四军医大学西京医院病理科. 免疫组化选用的一抗有mAb CD45RO(Dako), CD20(Dako), CD79α(Neomarkers), CD56 (Neomarkers), TIA1(Counlter), Eselectin (Neomarkers)，多克隆抗体CD3ε(Neomarkers)和cathepsin D(Santa Cruz). 超敏SP试剂盒，购自福州迈新生物技术开发公司；液体DAB酶底物显色试剂盒，购自武汉博士德生物工程有限公司；PNARNA原位杂交检测EBV基因转录产物EBER1/2所用FITC标记的EBER1/2肽核酸探针（Y5200）和原位杂交检测试剂盒（Y5201），购自丹麦Dako公司；原位杂交专用盖玻片和二乙基焦碳酸盐（dethyl pyrocarbonate, DEPC），购自美国Sigma公司.
 
　　1.2方法

　　1.2.1肿瘤细胞表型检测对41例鼻部非何杰金氏恶性淋巴瘤采用免疫组化SP法检测T细胞抗原CD45RO和CD3ε；B细胞抗原CD20和CD79α；NK细胞相关抗原CD56和毒性颗粒相关蛋白TIA1. CD45RO, CD20, CD79α和CD56阳性定位于细胞膜，CD3ε和TIA1阳性定位于胞浆，>20%的肿瘤细胞着色判为阳性［6］.
 
　　1.2.2EBER原位杂交杂交所用器具均经1 mL/L DEPC水浸泡过夜并高压灭菌处理，载玻片常规清洁、硅化后，180℃烘烤4 h以去除RNA酶. 组织切片常规脱蜡，蛋白酶K消化，选用FITC标记的肽核酸（PNA）探针EBER在石蜡切片上作原位杂交，桥接碱性磷酸酶标记的抗FITC抗体，以NBT/BCIP为碱性磷酸酶的底物检测杂交信号，显色后，3 mmol/L核固红衬染. 20%以上细胞阳性着色诊断为ISH阳性. 用已知EBERISH阳性的淋巴结非霍奇金恶性淋巴瘤石蜡包埋组织作阳性对照，DEPC水代替含探针的杂交液作阴性对照.
 
　　1.2.3鼻NK/T 细胞淋巴瘤诊断标准［7］病理改变为瘤细胞血管中心性浸润并破坏血管. 瘤细胞具有NK细胞表型（CD56+）或毒性T细胞表型（CD3ε+）以及细胞毒表现型（TIA1+）并与EB病毒感染密切相关（EBER+）.
 
　　1.2.4鼻NK/T细胞淋巴瘤CD和E选择素的检测采用免疫组化SP法，用已知CD阳性和E选择素阳性的切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照. CD阳性结果的定量采用格子系统（a grid system），格子为1 cm2，裱于10×目镜上并被分成4个小正方形. 在每例鼻NK/T细胞淋巴瘤及淋巴增生组织切片上分别随机记数10个高倍镜视野下固定方格内CD阳性细胞数，细胞计数最后被调整为个/cm2. E选择素阳性结果的定量按照每张切片随机观察并分别计数10个200倍视野中染色阳性的血管数和总血管数，计算平均阳性血管百分数/200倍视野.
 
　　统计学处理： 用统计软件SPSS10.0版对鼻NK/T 细胞淋巴瘤及增生淋巴组织CD和E选择素的表达进行Student s t检验, 以P<0.05为差异有统计学意义.