大蒜素对大鼠肝损伤细胞因子保护作用论文
【摘要】 目的 研究大蒜素对高脂饮食致大鼠慢性肝损伤的保护作用及内毒素(Lps)刺激引起肝脏枯否细胞(KCs)分泌细胞因子的变化。方法 Wistar大鼠随机分为3组，10周后腹主动脉采血测定血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白细胞介素(IL)6、IL(10)、肿瘤坏死因子(TNF)α水平，取肝组织用于组织病理切片的制备。分离培养KCs，检测在Lps刺激下KCs上清液中IL6、IL10、TNFα的水平。结果 大鼠发生慢性肝损伤时，血清ALT及IL6、TNFα水平明显升高(P<005)，IL10水平显著下降(P<001)，大蒜素可减轻慢性肝损伤，降低血清IL6水平(P<005)。各组大鼠分离培养KCs在加入Lps刺激后，上清液中IL6、TNFα水平变化与以上结果十分相似，药物组L10水平显著升高(P<005)。结论 大蒜素对肝脏的保护作用，可能通过调节KCs对细胞因子的分泌来实现。
【关键词】 大蒜素
大蒜素作为一种来源广泛的含硫化合物，其对四氯化碳、酒精等引起的肝损伤有明显保护作用。研究发现，大蒜素对高脂饮食引起的慢性肝损伤有明显的保护作用，但机制尚未阐明。为此，我们通过复制大鼠慢性肝损伤模型，观察大蒜素对肝脏枯否细胞(KCs) 分泌调节的影响。
1 材料与方法
11 材料
111 实验动物 Wistar 雌性大鼠，体重150～170g(山西医科大学动物中心)。
112 主要试剂及药物 胆固醇(北京化学试公司)；大蒜素胶囊(湖北金龙药业公司)；IV型胶原酶、胎牛血清培养液(DMEM)、Percoll液、内毒素(Lipopolysaccharide,Lps from Escherichia coli 0111:B4)(美国Sigma公司)；白细胞介素(IL)6、IL10、肿瘤坏死因子(TNF)α(解放军总医院科技开发中心放射免疫所)；胎牛血清(杭州四季青生物工程公司)。
12 方法
121 动物模型的建立 选用雌性Wistar大鼠36只，正常喂养1周后随机分为3组，对照组正常饮食饲养；模型组给予高脂饮食(普通饲料+5%的胆固醇+15%的玉米油)；药物组高脂饮食同时隔日大蒜素(05%，10ml/kg)灌胃。10周后各组取实验动物8只，1%戊巴比妥钠麻醉后腹主动脉采血处死动物，取肝左叶置于10%中性福尔马林固定备做病理切片。
122 血清指标的检测 采集的血液经肝素抗凝后，3 000r/min离心15 min，分离血浆，用于丙氨酸氨基转移酶(ALT)、IL6、IL10、TNFα水平的检测，按试剂盒说明书进行操作。
123 枯否细胞的分离、培养及鉴定 采用改进Seglen胶原酶两步灌流和Percoll密度梯度离心法分离得到各组大鼠肝脏细胞，经5%CO2、37℃恒温培养箱孵育4h,洗去未贴壁细胞。经台盼蓝非特导性酯酶染色，活性和纯度分别达到95%时，调细胞数为5×106，接种于48孔培养板中，每组8孔。
124 培养上清液细胞因子的检测 于培养液中加入100mg/ml Lps2滴，4h后收集培养上清，用于IL8、TNFα、IL10的测定。
13 统计分析 计量资料用±s表示，采用SPSS 120软件进行方差分析(SNK法)。
2 结果
21 慢性肝损伤结果
211 肝组织病理学变化 肝组织病理学显示，模型组与药物组大鼠体肝组织均出现不同程度的弥漫性改变，肝内可见到大量的脂肪空泡(肝小叶内含脂滴细胞/总细胞数>1/3)及肝细胞气球样变、小叶内和汇管区有大量的以单核细胞、淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，但未见明显肝纤维化，表明慢性损伤大鼠发生脂肪肝炎；与模型组相比，药物组大鼠肝组织炎性细胞浸润明显减轻。
212 血清ALT的变化 对照组为(615±126)u/L，而模型组与药物组ALT水平明显升高，分别为(2103±1054)，(1441±729)u/L，与对照组比较，P<005。药物组与模型组比较，ALT水平显著下降，差异有统计学意义，P<005。
213 血清IL6、IL10、TNFα的变化(表1) 随着动物发生慢性肝损伤，模型组与药物组IL6、TNFα水平明显升高 ，IL10则明显下降；药物组IL6水平明显低于模型组，而TNFα降低及IL10升高，差异无统计学意义。
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